朱海生^1,2 , 卢丽芳³ , 温庆放^1,2 , 林义章³

1 福建省农业科学院作物研究所, 福州, 350013;
2 福建省农业科学院蔬菜研究中心, 福州, 350013;
3 福建农林大学园艺学院, 福州, 350002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2014 年, 第 12 卷, 第 24 篇   doi: 10.13271/j.mpb.012.000802
收稿日期: 2013年11月12日    接受日期: 2014年03月26日    发表日期: 2014年06月09日

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推荐引用：

Zhu H.S., Lu L.F., Wen Q.F., and Lin Y.Z., 2014, Establishment and optimization of ISSR-PCR amplification system in squash, Fenzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding), 12(4): 802-809 (朱海生, 卢丽芳, 温庆放, 林义章, 2014, 南瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化, 分子植物育种, 12(4): 802-809)

为获得南瓜ISSR最优扩增体系，为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础，本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料，采用单因素试验，对ISSR反应体系的Mg²⁺、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明，南瓜ISSR 25 μL最佳反应体系为：2.5 μL 10×Buffer，2.0 mmol/L Mg²⁺，0.3 mmol/L dNTP，1 U Taq酶，0.48 mmol/L引物，75 ng的DNA。在此基础上，对筛选出的12条引物进行退火温度的优化，最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系，选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证，结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富，且特异性强、重复性好，表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。

南瓜；ISSR；分子标记；PCR扩增